酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

ACP 在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機磷酸，常見于巨噬細胞的溶酶體內。ACP 常用于前列腺癌的輔助診斷。

測定原理：

在酸性環境中，ACP 催化對硝基苯磷酸二鈉水解生成 4-硝基ben酚，在 405nm 有特征光吸收；通過測定 405nm 吸光度增加速率，來計算ACP 活性。

酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒 酯酶系列

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀、96 孔板、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器和蒸餾水。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

粗酶液提取：

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、10000g 離心 10 min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3 min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定：

1. 酶標儀預熱 30 min，調節波長到 405 nm。

2. 在 EP 管中加入下列試劑

混勻，吸取 200µL 加入 96 孔板中，405 nm 下測定各管吸光值。ΔA=A 測定管-A 對照管。

注意：每個測定管需做一個對照管。

ACP 活性計算：

標準曲線 y = 7.3336x + 0.0179；R² = 0.9996；x 為標準品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。

1. 血液中ACP 活性計算

活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產生 1μmol 4-硝基ben酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/ml)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V 反總÷T÷V 樣

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）

2. 組織、細菌或細胞中 ACP 活性計算

（1） 按照蛋白濃度計算

活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產生 1 μmol 4-硝基ben酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷(V 樣×Cpr)

=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr

（2） 按照樣本質量計算

活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產生 1 μ mol 4-硝基ben酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W

（3） 按照細菌或細胞數量計算

活性單位定義：30℃中每 10⁴ 個細菌或細胞每分鐘催化產生 1 μ mol 4-硝基ben酚定義為 1 個酶活單位。

ACP 活力(μmol/min/10⁴ cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷（細胞數量×V 樣÷V 樣總）

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷細胞數量

V 反總：反應體系總體積（ml），1ml； W ：樣品質量，g； V 樣：加入反應體系中樣本體積（ml），

0.01ml；V 樣總：提取液體積，1ml；T：反應時間（min），30 min；500：細胞或細菌總數，500 萬。

注意事項：

ACP 不穩定，尤其在 37℃和pH 大于 7 的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當天準備；血清樣品中，每毫升血清中加入 10mg 檸檬酸氫二鈉或者 5mg 硫酸氫鈉，使pH 降至 6.5 以下，或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液 2～3 滴，置于 4℃可保存 1 周。

酸性磷酸酶（ACP）活性測定試劑盒 酯酶系列